Анатоксины. Получение и применение. Анатоксины Информативный метод для определения количества анатоксина

К сожалению, мы живём в таком мире, где даже небольшой порез кожи может таить в себе серьёзную угрозу для жизни человека. Сегодня мы познакомимся с таким опасным заболеванием, как столбняк. Здравствуйте, мои хорошие! Заболевание, о котором мы сегодня поговорим, с незапамятных времён уносило и по сей день продолжает уносить тысячи человеческих жизней. Впервые полное описание столбняка дал великий учёный ум прошлого Гиппократ, семья которого, из-за этого недуга лишилась сына. Вплоть до конца 19 века медицине не удавалось установить истинную причину возникновения столбняка, однако, лекари и врачеватели справедливо связывали его развитие с ранениями. Возбудителя заболевания – столбнячную палочку, удалось выделить выдающемуся российскому хирургу Нестору Дмитриевичу Монастырскому в 1883 году. Но только спустя почти пол века, в середине двадцатых годов двадцатого столетия, усилиями французского иммунолога Г. Рамона, медицина сделала прорыв в лечении столбняка. Именно Г. Рамону принадлежит методика получения столбнячного анатоксина, который и по сей день применяется в ходе вакцинации, защищая человечество от этого тяжёлого недуга. Не будет ошибкой сказать, что практически во всех странах третьего мира, где вакцинация не проводится, число заразившихся столбняком ежегодно превышает 1 миллион. А от его последствий, по данным Всемирной Организации Здравоохранения, погибает около 400 тысяч человек. Что же представляет из себя столбняк и почему он так опасен? Столбняк или Tetanus – острое инфекционное заболевание передающееся контактным путём. Заболеть столбняком можно в любой части земного шара, но большая вероятность заражения, в случае ранения, наблюдается в условиях жаркого влажного климата, где наличие возбудителя болезни в почве чрезвычайно высоко, а заживление ран растягивается на длительное время. Возбудитель заболевания – спорообразующая подвижная анаэробная бактерия Clostridium tetani, которая вырабатывает один из самых сильных токсинов встречающихся на планете - тетаноспазмин. Наличие в организме тетаноспазмина в количестве всего лишь 2 нг на 1 кг веса, способно привести к смерти. Обитает бактерия в кишечнике травоядных животных, птиц и человека, куда она попадает с загрязнённой пищей. С испражнениями столбнячная палочка оказывается во внешней среде, где существует в виде спор, которые очень устойчивы к агрессивным воздействиям. Например, температуру в 90 °С споры способны выдерживать на протяжении двух часов. Находясь в кишечнике хозяина, бактерия не вызывает никаких нарушений. А вот при попадании возбудителя в рану, лишённую доступа кислорода, из спор происходит развитие и дальнейшее размножение бактерий, сопровождающиеся выделением токсинов, которые поражают нервную систему. В подавляющем большинстве случаев заражение столбняком происходит в результате ранения ног. По этой причине, в народе столбняк ещё называют «болезнью босых ног». Ранения могут носить различный характер: порезы, проколы, потёртости, ожоги, обморожения. Даже банальная заноза способна стать причиной развития столбняка. Наиболее опасны колотые и глубокие раны, в которые отсутствует доступ кислорода. Образовавшийся в результате жизнедеятельности бактерий тетаноспазмин, через отростки нервных клеток проникает в центральную нервную систему нарушая деятельность спинного и головного мозга. С момента заражения до первых симптомов проявления столбняка, в среднем, проходит около двух недель, но иногда этот промежуток времени может уменьшаться до 1-4 дней или увеличиваться до месяца, в зависимости от тяжести течения. Как правило, заболевание начинается остро. Первый признак столбняка – появление тянущих болей и подёргивание мышц в месте проникновения инфекции, где к этому времени, зачастую, уже произошло полное заживление раны. Следующим, наиболее характерным симптомом столбняка, является сильное напряжение и судороги жевательных мышц, вызывающие затруднённое открывание рта. Вслед за этим развиваются судороги мимической мускулатуры, придающие лицу выражение так называемой «сардонической улыбки». Человек одновременно как бы улыбается и плачет: на лбу появляются морщины, глазные щели сужаются, губы растягиваются в ширину, а углы рта опускаются. В результате спазма мышц глотки больному становиться тяжело и больно глотать. Из-за нарастающего напряжения в той или иной группе мышц больной может принимать самые разнообразные, иногда причудливые позы. При тяжёлом течении столбняка, вследствие резкого спазма мышц спины, голова запрокидывается, тело выгибается таким образом, что между спиной и постелью можно просунуть руку. Мучительные, резко болезненные судороги распространяются на всё тело вызывая удушье, паралич сердца или остановку дыхания. Из самых грозных осложнений столбняка следует отметить переломы костей, вывихи, разрывы мышц и сухожилий вызванные сильными мышечными судорогами и заражение крови обусловленное наслоением вторичной бактериальной инфекции. В случае положительного исхода заболевания, выздоровление наступает не раньше, чем через 1,5-2 месяца, а реабилитационный период растягивается на долгие годы. Лечение столбняка проводится только в медицинской клинике в отделении интенсивной терапии и реанимации. Без оказания квалифицированной помощи больной чаще всего погибает. Как же обезопасить себя и защититься от заражения столбняком? В первую очередь, любые раны и царапины следует промыть, обработать антисептиком (перекисью водорода, раствором бриллиантовой зелени и др.) и наложить чистую сухую повязку. Тем не менее, как бы тщательно не была проведена обработка раны, в случае со столбняком этого может оказаться не достаточно. В настоящее время основой как экстренной, так и плановой профилактики столбняка является вакцинация, о необходимости которой мы с Вами достаточно подробно говорили в предыдущих выпуска. Если за последние 10 лет получивший ранение человек не прививался от столбняка, то ему, чтобы предотвратить вероятное заражения, следует незамедлительно обратиться в ближайшее медицинское учреждение для введения противостолбнячной сыворотки. Помните, столбняк – очень коварное и тяжёлое заболевание, нередко приводящее к смерти. В случае, если Вы не привиты от него, не игнорируйте посещение врача. Проще обезопасить себя прививкой, нежели долго и упорно лечить как саму болезнь, так и её последствия! Не болейте! Ставьте лайки! Подписывайтесь на канал! Здоровья Вам!

Анатоксин (токсоид) - это биологически активный препарат, получаемый путем обезвреживания бактериальных токсинов воздействием при t° 39-40° (способ Рамона) или другими способами. Анатоксин обладает специфическими антигенными и иммуногенными свойствами исходного токсина и приобретает новые - безвредность, стабильность. Наиболее важным свойством анатоксина является иммуногенность, то есть способность вызывать развитие иммунитета у людей. Наиболее высокая иммуногенность у столбнячного, дифтерийного, ботулинического анатоксина.

Анатоксин (Anatoxinum; от греч. ana - против + токсин; синоним токсоид) - безвредный дериват токсина, который под действием формалина и тепла утратил полностью токсические свойства исходного токсина и сохранил антигенные и иммуногенные свойства.

Анатоксин совершенно безвреден, необратим (никакие химические и физические воздействия не могут возвратить препарату исходную токсичность). Анатоксин очень стоек (переносит повторное замораживание и оттаивание, хорошо противостоит высокой температуре) и весьма стабилен при длительном хранении. Антигенные свойства анатоксина (т. е. его пригодность для активной иммунизации) определяются реакцией флоккуляции (см.) и содержанием флоккулирующих (антигенных) единиц (Lf) в 1 мл препарата. Эффективность (например, дифтерийного анатоксина) доказана многочисленными экспериментами на животных и результатами изучения иммунитета у детей и взрослых, иммунизированных этим препаратом против дифтерии.

Нативный дифтерийный анатоксин должен содержать не менее 20 Lf в 1 мл. В настоящее время вместо нативного дифтерийного анатоксина для активной иммунизации против дифтерии используют очищенный сорбированный дифтерийный анатоксин. Введение человеку дифтерийного анатоксина в большинстве случаев не сопровождается нежелательными реакциями на прививку. Чем меньше возраст привитого, тем реже наблюдается «прививочная реакция» (в течение 24-48 час.), выражающаяся в повышении t° до 38,5° и в плохом самочувствии. Применение дифтерийного анатоксина для активной иммунизации против дифтерии позволило значительно снизить заболеваемость. Установлена эффективность активной иммунизации против столбняка столбнячным анатоксином, доказано ее преимущество перед серопрофилактикой столбняка.

Воздействуя на бактериальные токсины определенными концентрациями формалина и выдерживая токсин при t° 37-40° в течение времени, необходимого для полного обезвреживания и перехода токсина в анатоксин, удалось получить препараты, применяемые для специфической профилактики и терапии ряда инфекций. Таковы анатоксины стафилококковый, ботулинический, дизентерийный, анатоксин из токсинов, продуцируемых возбудителями газовой гангрены, анатоксины из яда некоторых ядовитых змей, анатоксин из абрина.

В настоящее время анатоксины подвергают очистке от балластных белковых и других азотистых веществ, применяют концентрирование специфических антигенов в меньших объемах. Наиболее распространенными методами обработки анатоксинов являются осаждение нативных анатоксинов. нейтральными солями (сернокислый аммоний), солями тяжелых металлов, преципитация кислотами (соляной, трихлоруксусной, метафосфорной) при изоэлектрической точке, а также осаждение при помощи этанола и метанола при низкой температуре и т. п. В результате удается получать препараты, которые по своим антигенным и иммуногенным свойствам значительно превосходят исходные нативные анатоксины. Получен ряд ассоциированных очищенных концентрированных сорбированных на гидроокиси алюминия анатоксинов, применяемых для одновременной иммунизации против нескольких инфекций: ассоциированный дифтерийно-столбнячный анатоксин для активной иммунизации против дифтерии и столбняка, дифтерийно-столбнячно-коклюшная вакцина для одновременной активной иммунизации против указанных инфекций. Иммунизация сорбированным дифтерийно-столбнячным анатоксином производится двукратно подкожно в дозах по 0,5 мл с интервалом между ними в 30-45 дней с первичной ре-иммунизацией, которая осуществляется прививкой 0,5 мл препарата через 6-9 мес. Последующие реиммунизации детей производят дозой по 0,5 мл препарата. См. также Токсины.

Анатоксины (от an - отрицание, toxo - отравляю) - препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Метод получения анатоксина предложил в 1923 г. французский ученый Рамон.

Для приготовления анатоксинов культуры бактерий, продуцирующих экзотоксины, выращивают в жидких питательных средах для накопления яда, а затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3-0,4% раствора формалина и помещают в термостат при температуре 37-40 °С на 3-4 нед до полного исчезновения токсических свойств. Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.

Такие препараты получили название нативных анатоксинов , так как они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата. Поэтому в настоящее время применяются преимущественно очищенные анатоксины, для чего нативные анатоксины подвергают обработке различными физическими и химическими методами (ионообменная хроматография, кислотное осаждение и др.), чтобы освободить от всех балластных веществ и сконцентрировать препарат в меньшем объеме. Однако уменьшение размеров частиц анатоксина вызвало необходимость адсорбировать препарат на адъювантах. Таким образом, применяющиеся анатоксины являются адсорбированными высокоочищенными концентрированными препаратами. Специфическую активность анатоксина определяют в реакции флоккуляции, в так называемых единицах флоккуляции, или в реакции связывания анатоксинов, выражающейся в единицах связывания (ЕС).

Титрование анатоксинов в реакции флоккуляции (по методу Рамона) производят по стандартной флоккулирующей антитоксической сыворотке, в которой известно количество Международных антитоксических единиц (ME) в 1 мл. Одна антигенная единица анатоксина обозначается Limes flocculationis (Lf - порог флоккуляции); это то количество анатоксина, которое целиком связывается с одной антитоксической единицей антитоксина.

Антигенные свойства анатоксинов обозначают и в единицах связывания. Для определения ЕС необходимы испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксическая сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME стандартной сыворотки), белые мыши.

Реакцию связывания проводят следующим образом: в ряд пробирок с одинаковым объемом стандартной антитоксической сыворотки добавляют различные разведения испытуемого анатоксина. Смесь для связывания выдерживают в термостате 45 мин, затем в каждую пробирку добавляют опытную дозу токсина и вновь оставляют в термостате на 45 мин. После этого из каждой пробирки смесь (сыворотка + анатоксин + токсин) вводят 2-4 мышам и наблюдают за их состоянием в течение 4 сут. Если весь анатоксин, добавленный к сыворотке, связался ею, то добавление токсина и последующее введение смеси мышам ведет к их гибели. При недостаточной дозе анатоксина для связывания всей сыворотки добавленный токсин нейтрализуется сывороткой, и мыши не погибают.

Анатоксины применяются для профилактики и, реже, лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк и некоторые заболевания, вызванные стафилококками). Анатоксины выпускаются в виде монопрепаратов и в составе ассоциированных вакцин, предназначенных для иммунизации против нескольких заболеваний.

Препараты, предназначенные для проведения иммунизации против одной какой-либо инфекции, получили название моновакцины , против двух инфекционных заболеваний- дивакцины, против трех - тривакцины , против нескольких инфекций - поливакцины . Ассоциированными вакцинами называются препараты, содержащие смесь из антигенов различных бактерий и анатоксинов. Применение ассоциированных вакцин, таких как АКДС или TABte, позволяет создавать иммунитет в отношении нескольких инфекций и сокращать число прививок.

Поливалентными вакцинами принято называть препараты, которые включают несколько разновидностей или серологических типов возбудителей одной инфекции (например, противогриппозные, лептоспирозные и др.).


Анатоксины (anatoxinum от греч.- «an» - отрицание и toxo» - отравляю) представляют собой препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Метод получения анатоксина предложил в 1923 году крупнейший французский ученый Рамон (G. Ramon). При приготовлении анатоксинов культуры бактерий - возбудителей токсинемических инфекций, продуцирующих экзотоксины, выращивают в жидких питательных средах (реакторах большой емкости) для накопления токсина. Затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3-0,4 % -формалина и помещают в термостат при температуре 37°-40°С н а 3-4 недели до полного исчезновения токсических свойств.

Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Такие препараты получили название нативных анатоксинов, т. к. они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата.

Нативные анатоксины необходимо вводить в больших дозах из-за их невысокой удельной активности. Поэтому в настоящее время применяются преимущественно очищенные анатоксины, для чего нативные анатоксины подвергают обработке различными физическими и химическими методами (ионнообменной хромотографии, кислотному осаждению и др.), чтобы освободить от всех балластных веществ и сконцентрировать препарат в меньшем объеме. Однако уменьшение размеров частиц анатоксина сделало необходимым адсорбировать препарат на адъютантах.

Таким образом, применяющиеся анатоксины являются адсорбированными высокоочищенными концентрированными препаратам:"Специфическую активность или силу анатоксина определяют в реакции флоккуляции в так называемых единицах флоккуляции - (Lf) или по реакции связывания анатоксинов, выражающуюся в единицах связывания- (ЕС). Титрование анатоксинов в реакции флоккуляции (по методу Рамона) производят по стандартной флоккулирующей антитоксической сыворотке, в которой известно количество международных антитоксических единиц (ME, см. с. 23) в 1 мл. Одна антигенная единица анатоксина обозначается Limes flocculationis (Lf - порог флоккуляции), это то количество анатоксина, которое вступает в реакцию флоккуляции с одной единицей дифтерийного антитоксина.

Определив дозу анатоксина, давшую инициальную (первичную) реакцию флоккуляции с одной антитоксической единицей сыворотки, рассчитывают количество Lf препарата в 1 мл. Антигенные свойства столбнячного анатоксина (и некоторых других) обозначают в единицах связывания (ЕС). Для определения ЕС необходимы:испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксическая сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME стандартной сыворотки), белые мыши.Реакцию связывания проводят следующим образом: в ряд пробирок с одинаковым объемом стандартной сыворотки добавляют различные разведения испытуемого анатоксина.Смесь для связывания выдерживают в термостате 45 минут,затем в каждую пробирку добавляют опытную дозу токсина и вновь оставляют в термостате на 45 минут.

После этого из каждой пробирки вводят смесь (сыворотки - анатоксина -токсина) 2-4 мышам и наблюдают за состоянием животных в течение 4 суток. Если весь анатоксин, добавленный к сыворотке, связался ею, то добавление токсина и последующее заражение мышей ведет к их гибели. При недостаточной дозе анатоксина для связывания всей сыворотки, добавленный токсин нейтрализуется сывороткой, и мыши остаются живыми. Для расчета ЕС в 1 мл определяемого анатоксина берется то разведение анатоксина, при котором происходит гибель 50% белых мышей на 4-е сутки. Это количество анатоксина содержит дозу, связывающую 0,1 ME сыворотки. Анатоксины применяются для профилактики и реже для лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк) и некоторых заболеваний, вызванных стафилококками.